在藥品分析方法建立和驗(yàn)證的過程中,準(zhǔn)確度驗(yàn)證是其中極為重要的一項(xiàng)。作為分析人員,你是否會遇到回收率實(shí)驗(yàn)總不合格,結(jié)果忽高忽低?這也許是雜質(zhì)溶解性在作怪!以下是我在實(shí)際工作過程中對于方法建立、化合物溶解性與回收率方面的一些心得,與大家分享。
對于方法建立起初需要對化合物的性質(zhì)進(jìn)行預(yù)判,對化合物和其相關(guān)雜質(zhì)的溶解度進(jìn)行考察,以備選擇正確的稀釋液以及稀釋液配比。
如果稀釋液及其比例的選擇不正確,會在分析方法建立之初及方法學(xué)驗(yàn)證階段出現(xiàn)問題。
下面是稀釋液配比不一致,造成回收率試驗(yàn)波動較大的典型案例:
準(zhǔn)確度驗(yàn)證原方案
第一次:
第二次:
分析原因
?兩次回收率結(jié)果檢測不平行,重現(xiàn)性結(jié)果差異大。
?增大稱樣量、增大移液體積、更換實(shí)驗(yàn)員操作,排除了人員儀器操作等因素。
?分析實(shí)驗(yàn)方案,對比可知對照品溶液和回收率溶液溶劑配比不一致。
① 空白溶劑:0.1mol/L鹽酸-甲醇(1:9)
②對照品溶液溶劑配比:0.1M鹽酸-甲醇(0.0005ml:0.9995)=(1:1999)
③100%回收率溶液溶劑配比:0.1M鹽酸-甲醇(5.0005ml:44.9995)≈(1:9)
?回收率偏高,原因分析:
對照品溶液中雜質(zhì)峰面積偏小:雜質(zhì)在0.1mol/L鹽酸中易溶解,后步稀釋采用甲醇稀釋,可能會導(dǎo)致該雜質(zhì)析出,從而使對照品峰面積偏??;因此會導(dǎo)致回收率偏大。
結(jié)論:雜質(zhì)與API受溶解度影響較大,肉眼明視溶液澄清,但內(nèi)在溶解性存在差異,導(dǎo)致回收率重現(xiàn)性差異較大。
驗(yàn)證試驗(yàn)
雜質(zhì)儲備液:精密稱取雜質(zhì)對照品2mg,置10ml量瓶中,加0.1mol/L鹽酸1ml使溶解,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取1ml,置20ml量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,搖勻,即得(1000%)
對照品溶液:精密量取雜質(zhì)儲備液1ml,置10ml量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度,搖勻
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
?各雜質(zhì)與API溶解性在分析方法建立及驗(yàn)證中微妙變化會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
?溶劑的選擇、重現(xiàn)性驗(yàn)證在分析方法建立中尤為重要;
?試驗(yàn)操作精準(zhǔn),排出操作誤差、設(shè)備誤差,更有利于結(jié)果分析判斷。
溫馨提示:主成分在稀釋劑中的飽和溶解度,最好滿足飽和溶解度大于3倍的供試品濃度!
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