眾所周知，藥物中限度低的雜質(zhì)特別是遺傳毒性雜質(zhì)一般以痕量形式存在，對(duì)分離檢測(cè)技術(shù)提出了很大的挑戰(zhàn)。同時(shí)，藥物本身的理化性質(zhì)如溶解度或與雜質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)等原因，常常導(dǎo)致方法的開發(fā)和驗(yàn)證會(huì)遇到很大的困難，需要我們?cè)?span style="background-color: #f1c40f">樣品前處理和檢測(cè)設(shè)備的選擇上開動(dòng)腦筋。
下面是我們?cè)跈z測(cè)實(shí)踐中遇到的一些經(jīng)典案例，在此與大家分享。這些案例不僅說明了前處理的重要性，也從側(cè)面反映出有機(jī)合成背景對(duì)于解決檢測(cè)難題的必要性。
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檢測(cè)水解中間體解決硫酸二甲酯不穩(wěn)定問題
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硫酸二甲酯是重要的化工原料，常作為甲基化試劑用于有機(jī)合成領(lǐng)域。因其含有遺傳毒性雜質(zhì)警示結(jié)構(gòu)，在ICH M7中歸屬為3類基因毒性雜質(zhì)，可能成為引發(fā)癌癥的誘因，因此，能夠檢測(cè)藥物中殘留的硫酸二甲酯對(duì)于控制臨床用藥的安全性具有非常重要的意義。
保護(hù)活性基團(tuán)解決檢測(cè)回收率低的問題
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檢測(cè)物質(zhì)：氨基磺酸甲酯檢測(cè)難點(diǎn)：檢測(cè)某個(gè)藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)氨基磺酸甲酯時(shí)，發(fā)現(xiàn)回收率很低，無法達(dá)到方法驗(yàn)證的要求。
解決方案：通過原因分析發(fā)現(xiàn)，氨基磺酸甲酯是工業(yè)上常用的甲基化試劑，可與藥物中的氨基進(jìn)行甲基化反應(yīng)，從而導(dǎo)致回收率極低的后果。因此，我們?cè)谙蛩幬锛訕?biāo)之前，先用稀甲酸與藥物中的氨基反應(yīng)，將與氨基磺酸甲酯反應(yīng)的活性基團(tuán)保護(hù)起來，這樣就用簡單的辦法解決了回收率不合格問題。
兩相萃取法解決離子檢測(cè)時(shí)藥物的溶解性問題
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檢測(cè)物質(zhì)：氯離子
檢測(cè)難點(diǎn)：用離子色譜法檢測(cè)某個(gè)藥物中的氯離子以確定其與鹽酸的成鹽率時(shí)，發(fā)現(xiàn)藥物主成分完全不溶于稀氫氧化鈉水溶液，導(dǎo)致氯離子的檢測(cè)無法進(jìn)行。
解決方案：根據(jù)該藥物的結(jié)構(gòu)，我們判定其有機(jī)結(jié)構(gòu)部分應(yīng)溶于乙酸乙酯，而鹽酸部分應(yīng)溶解在氫氧化鈉溶液中形成游離氯離子，因此，將該藥物溶解在50:50的有機(jī)相和水相中，再取水相進(jìn)行離子色譜檢測(cè)，輕松解決了由于藥物溶解度問題而導(dǎo)致的檢測(cè)難題。
多種檢測(cè)模式自由切換…總有一款適合你
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檢測(cè)物質(zhì)：乙酰溴檢測(cè)難點(diǎn)：起初使用氣質(zhì)法對(duì)殘留試劑乙酰溴直接進(jìn)行檢測(cè)，但是靈敏度不達(dá)要求?？紤]到乙酰溴極易水解，水解后可以檢測(cè)生成的乙酸，即可達(dá)到定量檢測(cè)乙酰溴的目的。但是，通過嘗試我們發(fā)現(xiàn)，因乙酰溴為遺傳毒性雜質(zhì)，其限度很低，即使使用高端儀器仍無法解決乙酸檢測(cè)靈敏度低的問題。
綜上，我們僅僅提供了在檢測(cè)實(shí)踐中遇到問題的解決思路，由于藥物種類繁多，雜質(zhì)特性多種多樣，加之藥物主成分對(duì)檢測(cè)的干擾，需要我們具體問題具體分析。原則上，只要我們開動(dòng)腦筋，所有雜質(zhì)均應(yīng)有辦法進(jìn)行檢測(cè)，但前提是對(duì)雜質(zhì)和藥物主成分的性質(zhì)要有深刻了解，熟悉有機(jī)化學(xué)反應(yīng)和機(jī)理，熟悉所用儀器設(shè)備的性能，可在多種檢測(cè)模式進(jìn)行自由切換，終能達(dá)到為每個(gè)雜質(zhì)建立合適檢測(cè)方法的目標(biāo)。
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